४-नाइट्रोफेनाइल बिटा-डी-ग्यालेक्टोपाइरानोसाइड CAS:२००४२२-१८-०

प्रभाव: ONPG एक सब्सट्रेट हो जुन विशेष गरी β-galactosidase इन्जाइमको उपस्थिति र गतिविधि पत्ता लगाउन प्रयोग गरिन्छ। जब β-galactosidase इन्जाइम उपस्थित र सक्रिय हुन्छ, यसले ONPG लाई दुई उत्पादनहरूमा विभाजन गर्दछ: o-nitrophenol र galactose derivative। o-nitrophenol को मुक्तिले पहेंलो रंग परिवर्तन गर्दछ, जुन स्पेक्ट्रोफोटोमिटर प्रयोग गरेर मापन गर्न सकिन्छ।

अनुप्रयोग: ONPG का आणविक जीवविज्ञान र जैव रसायन अनुसन्धानमा धेरै अनुप्रयोगहरू छन्:

β-galactosidase गतिविधिको निर्धारण: ONPG सामान्यतया β-galactosidase इन्जाइमको गतिविधि मापन र परिमाण निर्धारण गर्न प्रयोग गरिन्छ। ओ-नाइट्रोफेनोल गठनको दर, जुन इन्जाइम गतिविधिसँग प्रत्यक्ष समानुपातिक हुन्छ, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूपमा मापन गर्न सकिन्छ।

जीन अभिव्यक्ति र नियमन: ONPG प्रायः जीन अभिव्यक्ति र नियमन अध्ययनसँग सम्बन्धित प्रयोगहरूमा प्रयोग गरिन्छ। यो प्रायः फ्युजन प्रोटीन परीक्षणहरूमा प्रयोग गरिन्छ, जस्तै सामान्यतया प्रयोग हुने lacZ फ्युजन प्रणाली, विशिष्ट प्रमोटरहरूको नियन्त्रणमा रहेका जीनहरूको अभिव्यक्ति अध्ययन गर्न। ONPG प्रयोग गरेर मापन गरिएको बीटा-ग्यालेक्टोसिडेस गतिविधिले जीन अभिव्यक्तिको स्तरमा अन्तर्दृष्टि प्रदान गर्दछ।

β-galactosidase गतिविधिको लागि स्क्रिनिङ: ONPG लाई पुन: संयोजक DNA प्रविधिमा कलरिमेट्रिक स्क्रिनिङ विधिको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ जसले β-galactosidase लाई एन्कोड गर्ने LacZ जीनको उपस्थिति र कार्यक्षमता पहिचान गर्न सक्छ। यो स्क्रिनिङ विधिले रुचिको जीन समावेश गर्ने क्लोनहरू पहिचान गर्न मद्दत गर्दछ।

इन्जाइम गतिविज्ञान अध्ययन: ONPG β-galactosidase इन्जाइमको गतिविज्ञान अध्ययन गर्न पनि उपयोगी छ। विभिन्न सब्सट्रेट सांद्रतामा इन्जाइम-सब्सट्रेट प्रतिक्रियाको दर मापन गरेर, माइकलिस-मेन्टेन स्थिरांक (Km) र अधिकतम प्रतिक्रिया दर (Vmax) जस्ता गतिविज्ञान प्यारामिटरहरू निर्धारण गर्न सम्भव छ।