इष्टतम एकाग्रता कसरी निर्धारण गर्ने?
Inducer IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside) को लागि, उच्च एकाग्रता, राम्रो।इष्टतम एकाग्रता विशिष्ट प्रयोगात्मक अवस्था र वांछित प्रेरण प्रभावमा निर्भर गर्दछ।
सामान्यतया, IPTG को एकाग्रता 0.1-1 mM को दायरामा प्रयोग गरिन्छ।कम सांद्रताले कोशिकाको वृद्धिमा प्रतिकूल प्रभावहरू कम गर्न सक्छ र लक्ष्य प्रोटीनहरूको ओभरएक्सप्रेसनको कारण साइटोटोक्सिसिटी कम गर्न सक्छ।उच्च सांद्रताले अत्यधिक सेल मेटाबोलिक बोझ निम्त्याउन सक्छ, कोशिकाको वृद्धि र अभिव्यक्ति दक्षतालाई असर गर्छ।
इष्टतम एकाग्रता निर्धारण गर्ने तरिका विभिन्न सांद्रताहरूमा IPTG इन्डक्शन परीक्षणहरू सञ्चालन गरेर लक्षित प्रोटीनको अभिव्यक्ति स्तरको मूल्याङ्कन गर्न सकिन्छ।आईपीटीजी सांद्रताको दायरा (जस्तै ०.१ एमएम, ०.५ एमएम, १ एमएम, इत्यादि) प्रयोग गरेर साना स्केल कल्चर परीक्षणहरू गर्न सकिन्छ र विभिन्न सांद्रताहरूमा अभिव्यक्ति प्रभावलाई लक्षित प्रोटीनको अभिव्यक्ति स्तर पत्ता लगाएर मूल्याङ्कन गर्न सकिन्छ (जस्तै पश्चिमी धब्बा वा प्रतिदीप्ति पत्ता लगाउने)।प्रयोगात्मक नतिजाहरू अनुसार, उत्कृष्ट अभिव्यक्ति प्रभावको साथ एकाग्रतालाई इष्टतम एकाग्रताको रूपमा चयन गरिएको थियो।
थप रूपमा, तपाईले समान प्रयोगात्मक अवस्थाहरूमा सामान्यतया प्रयोग हुने IPTG एकाग्रता दायरा बुझ्नको लागि प्रासंगिक साहित्य वा अन्य प्रयोगशालाहरूको अनुभवलाई पनि सन्दर्भ गर्न सक्नुहुन्छ, र त्यसपछि प्रयोगात्मक आवश्यकताहरू अनुसार अनुकूलन र समायोजन गर्नुहोस्।
यो नोट गर्न महत्त्वपूर्ण छ कि इष्टतम एकाग्रता विभिन्न अभिव्यक्ति प्रणालीहरू, लक्ष्य प्रोटीनहरू, र प्रयोगात्मक अवस्थाहरूको आधारमा भिन्न हुन सक्छ, त्यसैले केस-दर-केस आधारमा अनुकूलन गर्नु उत्तम हुन्छ।
पोस्ट समय: सेप्टेम्बर-28-2023