Dithiothreitol (DTT) एक सामान्य रूपमा प्रयोग हुने घटाउने एजेन्ट हो, जसलाई नयाँ हरियो additive पनि भनिन्छ।यो दुई mercaptan समूह (-SH) संग एक सानो आणविक जैविक यौगिक हो।यसको कम गर्ने गुणहरू र स्थिरताको कारण, DTT जैव रसायन र आणविक जीवविज्ञान प्रयोगहरूमा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ।
DTT को मुख्य भूमिका प्रोटीन र अन्य जैविक अणुहरूमा डाइसल्फाइड बन्ड कम गर्नु हो।डाइसल्फाइड बन्ड प्रोटीन फोल्डिंग र स्थिरता को एक महत्वपूर्ण भाग हो, तर केहि प्रयोगात्मक अवस्थाहरु अन्तर्गत, जस्तै घटाउन योग्य SDS-PAGE विश्लेषण, प्रोटीन पुन: संयोजन र फोल्डिंग, यो को स्थानिक संरचना को खोल्न को लागी दुई thiol समूहहरुमा डाइसल्फाइड बन्धन कम गर्न आवश्यक छ। प्रोटिन।डीटीटीले डाइसल्फाइड बन्डहरूसँग प्रतिक्रिया गर्न सक्छ तिनीहरूलाई मर्काप्टन समूहहरूमा कम गर्न, यसरी प्रोटीनको स्थानिक संरचना खोल्छ र यसलाई विश्लेषण र हेरफेर गर्न सजिलो बनाउँछ।
डीटीटी पनि इन्जाइम गतिविधि र स्थिरता जोगाउन प्रयोग गर्न सकिन्छ।केही इन्जाइम-उत्प्रेरित प्रतिक्रियाहरूमा, इन्जाइमको गतिविधि अक्सिडेन्टद्वारा कम हुन सक्छ।DTT ले अक्सिडेन्टहरूसँग प्रतिक्रिया गर्न सक्छ तिनीहरूलाई हानिकारक पदार्थहरूमा कम गर्न, जसले गर्दा इन्जाइमको गतिविधि र स्थिरताको सुरक्षा गर्दछ।
β-mercaptoethanol (β-ME) जस्ता परम्परागत घटाउने एजेन्टहरूको तुलनामा, DTT सुरक्षित र अधिक स्थिर घटाउने एजेन्ट मानिन्छ।यो जलीय घोलमा मात्र स्थिर छैन, तर उच्च तापक्रम र एसिड-बेस अवस्थाहरूमा यसको घटाउने गुणहरू पनि कायम राख्छ।
DTT को प्रयोग अपेक्षाकृत सरल छ।सामान्यतया, DTT उपयुक्त बफरमा भंग गरिन्छ र त्यसपछि प्रयोगात्मक प्रणालीमा थपिन्छ।DTT को इष्टतम एकाग्रता विशिष्ट प्रयोग अनुसार निर्धारण गर्न आवश्यक छ, र सामान्यतया 0.1-1mM को दायरामा प्रयोग गरिन्छ।कम सांद्रताले कोशिकाको वृद्धिमा प्रतिकूल प्रभावहरू कम गर्न सक्छ र लक्ष्य प्रोटीनहरूको ओभरएक्सप्रेसनको कारण साइटोटोक्सिसिटी कम गर्न सक्छ।उच्च सांद्रताले अत्यधिक सेल मेटाबोलिक बोझ निम्त्याउन सक्छ, कोशिकाको वृद्धि र अभिव्यक्ति दक्षतालाई असर गर्छ।
इष्टतम एकाग्रता निर्धारण गर्ने तरिका विभिन्न सांद्रताहरूमा IPTG इन्डक्शन परीक्षणहरू सञ्चालन गरेर लक्षित प्रोटीनको अभिव्यक्ति स्तरको मूल्याङ्कन गर्न सकिन्छ।आईपीटीजी सांद्रताको दायरा (जस्तै ०.१ एमएम, ०.५ एमएम, १ एमएम, इत्यादि) प्रयोग गरेर साना स्केल कल्चर परीक्षणहरू गर्न सकिन्छ र विभिन्न सांद्रताहरूमा अभिव्यक्ति प्रभावलाई लक्षित प्रोटीनको अभिव्यक्ति स्तर पत्ता लगाएर मूल्याङ्कन गर्न सकिन्छ (जस्तै पश्चिमी धब्बा वा प्रतिदीप्ति पत्ता लगाउने)।प्रयोगात्मक नतिजाहरू अनुसार, उत्कृष्ट अभिव्यक्ति प्रभावको साथ एकाग्रतालाई इष्टतम एकाग्रताको रूपमा चयन गरिएको थियो।
थप रूपमा, तपाईले समान प्रयोगात्मक अवस्थाहरूमा सामान्यतया प्रयोग हुने IPTG एकाग्रता दायरा बुझ्नको लागि प्रासंगिक साहित्य वा अन्य प्रयोगशालाहरूको अनुभवलाई पनि सन्दर्भ गर्न सक्नुहुन्छ, र त्यसपछि प्रयोगात्मक आवश्यकताहरू अनुसार अनुकूलन र समायोजन गर्नुहोस्।
यो नोट गर्न महत्त्वपूर्ण छ कि इष्टतम एकाग्रता विभिन्न अभिव्यक्ति प्रणालीहरू, लक्ष्य प्रोटीनहरू, र प्रयोगात्मक अवस्थाहरूको आधारमा भिन्न हुन सक्छ, त्यसैले केस-दर-केस आधारमा अनुकूलन गर्नु उत्तम हुन्छ।
संक्षेपमा, DTT एक सामान्य रूपमा प्रयोग हुने घटाउने एजेन्ट हो जुन प्रोटीन र अन्य बायोमोलिक्युलहरूमा डाइसल्फाइड बन्डहरू कम गर्न र इन्जाइम गतिविधि र स्थिरताको रक्षा गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।यो जैव रसायन र आणविक जीवविज्ञान प्रयोगहरूमा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिएको छ।
पोस्ट समय: सेप्टेम्बर-28-2023